高效液相色譜儀的正確使用和科學保養(yǎng)：

一、保持貯液瓶清潔。對專用貯液瓶應定期清洗，用試劑瓶作貯液瓶時要經(jīng)常更換。

二、定期（如半個月）在4～6M稀硝酸溶液中超聲清洗過濾器，保持過濾器暢通無阻。

三、使用HPLC級試劑和新蒸二次蒸餾水作流動相，所用溶劑的截止波長一定要低于檢測波長，對不是HPLC級的試劑要進行過濾（HPLC試劑出廠前已用0.02µm濾膜過濾），流動相一定要脫氣。

四、每天開始使用儀器前，注意放空排氣，確保泵頭、流動池和其它流路系統(tǒng)中無氣泡存在。

五、避免色譜柱突然產(chǎn)生大的波動，如泵啟動過速、升壓過快和進樣閥搬動過慢造成的柱壓大的波動。

六、采用保護柱，延長柱壽命。如果污染物堆積于保護柱內(nèi)，造成柱壓升高，柱效下降，峰形變差時，卸下保護柱用強溶劑反沖后再用或更換新保護柱。

七、避免超負荷進樣，對Φ4.6×250mm色譜柱，絕對進樣量應不超過100µg。在靈敏度允許的前提下，應盡量降低樣品濃度，減少絕對進樣量（進樣體積可保持不變），這是保持色譜柱性能持久良好的重要舉措之一。

八、經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，將柱內(nèi)強保留組分及時洗脫出。反相柱用異丙醇－二氯甲烷（1：1）沖洗，正相柱（硅膠柱）用純甲醇或異丙醇沖洗，時間均不少于1h。

九、做完試驗后，及時用適當溶劑沖洗色譜柱和進樣閥。尤其是存放時間超過12h的色譜柱和進樣閥，一定要用足量的水徹底洗凈其中的鹽類和緩沖液，再用甲醇或乙腈沖洗，并保存在乙腈中。正相柱保存在非極性溶劑中。

十、以硅膠為基質(zhì)的色譜柱，如C18柱和C8柱等，要控制好流動相的pH值，一般不要低于2.5，不高于7。

十一、盡量用流動相溶解樣品，避免出現(xiàn)拖尾峰和怪峰，避免樣品在系統(tǒng)中由于溶解度降低而析出。

十二、對于阻塞或受傷嚴重的色譜柱，必要時可卸下不銹鋼濾板，超聲洗去濾板阻塞物，對塌陷污染的柱床進行清除、填充和修補。此舉措可使柱效恢復到一定程度（80%），有繼續(xù)使用的價值。

十三、檢測器輸出與積分儀要匹配，要合理設置參數(shù)，如斜率、半峰寬、閾值、AUFS值和衰減等。將適宜的進樣量和合適的參數(shù)結合起來，使主峰峰高達到記錄儀滿量程的80%左右。

十四、HPLC分析酸堿性物質(zhì)時，由于吸附作用（次級保留）使峰拖尾，加入改良劑可大大改善峰形，提高準確度。一般規(guī)則是：

1、分析酸性物質(zhì)時，可加入1%的醋酸。

2、分析堿性物質(zhì)時，可加入10～20mmol/L的三乙胺。

3、酸堿物質(zhì)混為一體時，可同時加入1%的醋酸和10～20mmol/L的三乙胺。

   

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